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大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒

簡要描述:售后:我公司具有優質的技術團隊,大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒一旦售出,產品僅用于科研實驗過程中遇到困難可提供在線技術咨詢。使您使用產品時沒有任何的后顧之憂。

  • 產品型號:GOY-2897E
  • 廠商性質:
  • 更新時間:2023-08-31 00:00:00
  • 訪  問  量:240

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英文名稱

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大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒

Rat macrophage inflammatory protein 1β, MIP-1β Elisa Kit

48T/96T

GOY-2897E

實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)水平。用純化的大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4),再與HRP標記的大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)濃度。 

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(80pg/ml

0.5ml×1

3

標包被

12×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

試劑配制:

1、酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。

2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。

3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6、標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1100

7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1100

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

1.jpg

操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

20pg/ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

10pg/ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

5pg/ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.5pg/ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。   

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

7.溫育:操作同3

8.洗滌:操作同5

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色10分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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